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Corning康宁澳洲胎牛血清使用中常会碰到的问题是什么
更新时间:2017-06-09   点击次数:1609次
   我们在应用Corning康宁澳洲胎牛血清的过程中,常会遇到一些问题,该如何应对呢。我们根据经验整理如下:

  1、如何储存和解冻Corning康宁澳洲胎牛血清才不会使产品质量受损?

  将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

  长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。

  建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内(由于血清结冻时体积会增加约10 %, 必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形),再放回冷冻。

  2、Corning康宁澳洲胎牛血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?

  沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。

  3、如何避免Corning康宁澳洲胎牛血清中产生沉淀?

  按如下操作可避免沉淀的产生:

  (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

  (2)血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。

  (3)勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。

  (4)勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

  (5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

  (6)若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

  4、胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?

  一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

  如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么黑点的出现可能与以下几种情况有关:

  (1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;

  (2)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;

  (3)血清质量不好,反复冻融的结果;

  (4)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;

  (5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。

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