PEI转染试剂转染效率低？教你几招快速优化

　　在细胞转染实验中，PEI(聚乙烯亚胺)作为一种常用的阳离子聚合物转染试剂，以其高效、相对安全且成本较低等优势被广泛应用。然而，有时会遇到PEI转染试剂转染效率不尽人意的情况，别着急，以下这些方法可以帮助你快速优化，提升转染效果。
 

　　一、试剂准备环节的优化
 

　　1、PEI浓度选择
 

　　不同细胞系对PEI的较佳耐受浓度有差异。首先要进行预实验，设置一系列梯度浓度的PEI溶液，如从低到高依次为1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL等，分别与相同量的DNA混合转染细胞，通过检测荧光蛋白表达或目的基因的mRNA水平等方式，确定能实现较高转染效率且细胞毒性相对较低的PEI浓度，后续正式实验就采用这个优化后的浓度。
 

　　2、DNA质量把控
 

　　确保所使用的质粒DNA纯度高，尽量避免存在蛋白质、RNA等杂质污染。可以采用合适的质粒提取试剂盒，按照规范操作流程提取，并且跑胶验证其完整性，只有高质量的DNA才能更好地与PEI结合形成稳定的复合物，进而提高转染效率。同时，注意DNA的用量也要合适，过多或过少都可能影响结果，一般也需要通过预实验摸索出较佳用量范围。
 

　　二、细胞状态调整
 

　　1、合适的细胞密度
 

　　在转染时，接种的细胞密度很关键。如果细胞过于稀疏，转染后可能由于细胞间缺乏足够的相互支持和信号交流，导致转染效率低下；而细胞过密，则容易出现营养竞争、空间不足等问题，同样不利于外源基因的导入和表达。通常对于贴壁细胞，转染前使其达到70%-80%左右的汇合度是比较理想的，悬浮细胞则要根据具体情况调整到适宜的细胞数量级，可通过多次实验找到适配自己细胞系的接种密度。
 

　　2、细胞活力维持
 

　　要保证细胞处于良好的生长状态，活力充沛。可以在转染前的一段时间内，定期更换新鲜的培养基，保证细胞有充足的营养供应。若发现细胞状态不佳，比如出现大量死细胞、形态异常等情况，可以先对细胞进行复苏或者传代培养，待细胞恢复正常生长态势后再进行转染操作，这样能有效提高转染成功率。
 

　　三、转染操作细节优化
 

　　1、复合物形成条件
 

　　PEI与DNA形成复合物时的环境和时间等因素会影响其转染效率。一般在无血清的培养环境下，将两者按一定比例缓慢混合，边加边轻轻振荡，让它们充分反应形成均匀、稳定的纳米级颗粒状复合物，这个过程大概持续15-30分钟为宜。而且要注意混合的操作手法尽量轻柔，避免破坏复合物结构。
 

　　(2、转染方式改进
 

　　不同的转染方式也会产生不同的效果。除了常规的直接将复合物加入细胞培养板的方式外，还可以尝试使用一些辅助手段，例如离心转染法，即在加入复合物后，通过短暂的低速离心，促使复合物更紧密地与细胞接触，增加进入细胞的机会，从而提高转染效率。不过该方法需要根据具体细胞类型和设备条件谨慎选择并优化参数。
 

　　总之，当遇到PEI转染试剂转染效率低的问题时，不要慌张，从上述多个方面综合考虑，仔细排查可能存在的问题，逐一进行优化调整，相信就能显著改善转染效果，助力细胞转染实验顺利进行。