ProteanFect Max转染试剂盒使用说明

产品简介

ProteanFect Max转染试剂盒是全·球首·款自组装蛋白纳米颗粒核酸转染试剂，专为原代细胞与难转细胞系设 计，能够实现卓·越的外源基因递送与表达。作为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂，ProteanFect Max能 高效且低毒性地转染mRNA、siRNA、DNA 等多种核酸。该试剂操作简便，仅需 5-15 分钟即可将核酸递送至原代 细胞内，最·快在 2 小时内观察到 mRNA 的表达效果。

试剂盒储存与成分说明

ProteanFect Max转染试剂盒在干冰中运输，收到后应存放于 -20℃到-80℃，直至使用。试剂盒规格依据 Reagent B的体积设定。试剂盒包含阳性对照样品，编码绿色荧光蛋白（EGFP）的mRNA和质粒DNA（pDNA）， 以验证实验操作及试剂效果。开封后，为确保试剂的最·佳性能，需根据表1中的存储条件妥善保管各组分。

实验前材料准备

 待转染细胞：转染前细胞必须处于良好的生长状态，活率＞90%。细胞在转染前一天需传代更换新鲜培养基， 贴壁转染需提前种板；对于部分原代细胞，建议在适当活化后进行转染。

 推荐培养基： Opti-MEM培养基（或无血清的RPMI 1640培养基/无血清DMEM培养基），提前预热或恢复至室 温。

 转染试剂：室温自然解冻，颠倒或涡旋至溶液均一后使用。

 其他：完·全培养基，无菌EP管、所需转染的核酸样品。

a, 对于原代细胞，建议在转染前进行适当的激活处理，以提高转染效果。 b, 在配置 ProteanFect 转染体系过程中，如出现轻微粘稠现象，属正常现象。体系配置完成后建议置于冰上保存；如需在室 温下保存，须在 30 分钟内使用完毕。 c, 部分贴壁细胞可通过悬浮转染方式提升转染效率，即在转染当日将细胞消化为单细胞悬液，后续操作流程与悬浮细胞一致。 d, 孵育时间可根据不同细胞类型进行适当调整。对于细胞系，孵育时间建议不超过 2 小时；对于原代细胞，孵育时间建议不 超过 45 分钟。 e, 阳性对照 mRNA 可在转染后 5–48 小时内检测 EGFP 表达；阳性对照 pDNA 可在转染后 24–48 小时检测 EGFP 表达； 转染 siRNA 后敲低效率检测建议在 48–72 小时内进行。

常见问题：

1.如何提升转染效率 转染条件需根据细胞类型和培养条件进行优化。

建议：

1）延长转染时间：根据细胞状态适当延长转染时 间。通常原代细胞不超过1小时，细胞系不超过2小时。

2）提升Reagent C用量：对于细胞系转染，可在体系中添 加适当的Reagent C，以96孔板为例，添加8-13.5 μL，孵育15分钟，最长不超过45分钟；原代细胞则可将 Reagent C体积增加至13.5 μL，孵育时间同样不超过45分钟。

3）提升ProteanFect转染量：适当增加转染体系至 初始的1.5-2.5倍。

2. 质粒DNA能否用于原代细胞转染

双链DNA转染原代细胞可能引起一定的毒性，例如炎症应激，因此需根据实验目的谨慎选择。以人或小鼠 来源的原代T细胞为例，使用质粒DNA转染可能导致显著的细胞毒性，因此不适合此类细胞。而大多细胞系通常经 过多代培养，能更有效地应对外源DNA带来的压力，对双链DNA转染的耐受性较高，因此可以使用质粒DNA进行 转染。

3. 质粒DNA转染要求

转染效率受DNA质量影响。建议使用无内毒素试剂盒制备DNA，并确保OD值在1.7-1.9之间；使用无核酸 酶纯水将DNA稀释至0.5-2 µg/µL的浓度。

4. 细胞系转染前处理

1）为获得良好的转染效率，建议使用活性超过90%的细胞，可以通过台盼蓝染色测定细胞活性。2）不建 议使用传代次数超过15次的细胞进行实验。

3）新复苏的细胞在转染实验前需传代2-3次，待细胞恢复正常生长后 使用。

5. 原代细胞转染前预处理

对于原代细胞，充分活化有助于提高转染效率，因此建议在适当活化后进行转染。例如，人原代T细胞可 使用CD3/CD28磁珠或抗体进行激活，激活2-10天内均可转染，其中激活4-7天时转染效率高。

6. 关于试剂盒中阳性对照的使用建议

首·次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA或EGFP pDNA），以检测实验操作和试剂的有效性。 使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。