细胞冷冻保存：保持主要的技巧

冷冻保存领域随着时间的推移而飞跃发展。冷冻解决方案已经过优化和优化，新的开发成果使更长的存储时间和更好的恢复率成为可能。为了获得最佳结果，以下是冷冻活细胞或组织时研究人员应遵循的3个关键。

像历史许多其他重大发现一样，第一种冷冻保存介质是偶然产生的。早在1948年，由Polge，Smith和Parkes组成的研究人员小组研究了家禽的精子，并希望保存一些样本用于以后的实验。不确定如何发生，但他们没有将样品冷冻在随后用于保存细胞的溶液中，而是将细胞放在贴标签的瓶中，该瓶中含有甘油，蛋白和水的混合物。而且这种新混合物远比预期的解决方案更好，因此诞生了冷冻保存领域。

从此，该领域得到了发展，解决方案已经过改进和调整。现在可以在-20°C或-80°C的温度下存储活细胞和组织，而新的开发成果使更长的存储时间和更好的复苏率成为可能。此外，还使用-液氮（以液态或蒸气形式）在-196°C下进行低温保存，这已成为长期保存的重要条件。

冷冻细胞的三大秘诀

处理冷冻保存的细胞有许多不同的方法，每种方法根据预期用途，保存时间范围，冰箱的可用性等而有所不同。即使如此，所有冷冻保存方法都有一些共同点，研究人员应遵循这些共同点以取得最佳结果。

1.使用适合细胞的冻存液

无论使用“自制"还是商业冷冻介质，请务必使用适合您的细胞或组织的物质。有时，可以在相关论文中找到针对特定细胞类型或应用的优化信息。通过筛选多种配方，您可以找到适合您特定细胞的最佳培养基。解冻后评估细胞的恢复，附着（如果适用）和增殖。大多数细胞冷冻培养基是基于DMSO的（以不同的百分比表示），但也有基于甘油的溶液（通常用于细菌）。如果您有干细胞等敏感细胞，请考虑使用无动物成分的明确培养基，例如Origen的CP-70CE 认证 USP 级冻存液，让您可以更好地控制细胞的周围环境，并大大提高冻存和复苏效率。

2.注意速度。

冷冻样品时，重要的是要注意速度。一旦将冷冻培养基添加到细胞中，由于室温下细胞在DMSO中的暴露量有限，因此应尽可能快地工作。当然，切记不要为了速度而牺牲无菌性和人身安全！另一方面，请勿将小瓶直接放在液氮中或放在冰箱的盒子中。使用“ 允许样品以每分钟1°C的速度冷却的“冰霜"或类似的冷冻容器。放在-80°C的冰箱中过夜，然后将小瓶转移到液氮中。

3选择正确的存储位置。

冻存管放在哪里？在液氮内部还是在蒸气层中？一些研究人员声称，气相层中的存储效果更好，表明两相之间的温差不大，气相中存储的细胞不会暴露于潜在的支原体污染，这种污染通过液氮很难消除。

总之，请记住，安全是至关重要的，因此请小心处理冻存管，采取适当的生物安全措施处理冷冻培养基。

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