心肌分化试剂盒的冻存方法
更新时间：2016-01-21 点击次数：1521次
心肌分化试剂盒具备心肌定向分化能力，可用于人多潜能干细胞(hESC/iPSC)向心肌细胞诱导分化。分化获得的心肌细胞表达常规的心肌特异性基因，包括多种收缩蛋白和离子通道。同时，心肌细胞具备典型的心肌细胞电生理活性，能够对电生理和生物化学刺激做出心肌细胞的常规反应。分化获得的心肌细胞，各项特征与人体内心肌细胞高度相似，适合于基础和临床科学研究等。
心肌分化试剂盒包含有多肽类分化因子和涉及心肌细胞分化关键信号通路的调控因子的无血清培养基。在对人ESCs和iPSC不同细胞系的实验中，本试剂盒能得到心肌细胞分化效率比所有已发表方法都高的结果。
心肌分化试剂盒的特点主要有以下几点：
1.单层培养，均质分化
2.多细胞系可重复性好
3.跳动层细胞7天即可观察
4.诱导分化程序简单便捷
心肌分化试剂盒的冻存方法：
1、如果需要将心肌细胞长期保存，可对心肌细胞进行冻存，冻存操作会导致40%左右的细胞死亡。
2、37℃水浴预热PBS溶液和Accutase传代工作液，4℃预冷心肌分化试剂盒。
3、吸走心肌维持培养基，并且加入PBS溶液洗一次。
4、加入Accutase传代工作液使之*覆盖皿/瓶底。
5、37℃孵育15-20分钟，显微镜下观察到大部分细胞相互分离，表面细胞消化时间理想。
6、用枪扇形吹打培养皿/瓶底，使皿/瓶底贴附的心肌细胞脱落，将细胞转移至15ml离心管中，再向皿/瓶中加入适量PBS溶液润洗皿/瓶底，收集剩余细胞加入15ml离心管中。(注：吹打力度要轻柔，避免损伤心肌细胞)
7、200g离心5分钟。弃去上清，用重悬细胞，轻柔吹打混匀。
8、按复苏所需要的量，1ml每管冻存。
9、以1℃每分钟的速率降至-80℃过夜(一般常见商品化冻存盒均可提供此条件)。
10、-80℃过夜后，将冻存细胞转移至液氮保存。
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