心肌分化试剂盒的复苏和维持
更新时间：2016-02-26 点击次数：1568次
之前的文章中介绍过心肌分化试剂盒的冻存方法，本文再给大家说说心肌分化试剂盒的复苏和维持。
心肌分化试剂盒的复苏方法：
1. 37℃水浴预热心肌接种培养基，取出包被过Matrix的培养皿/瓶，吸去包被液并加入适量心肌接种培养基，置于5% CO2的37℃恒温细胞培养箱中。
2. 37℃解冻细胞，快速摇晃使细胞融化至仅剩一小块冰晶(避免冻存管盖接触水面)，迅速取出并用70%酒精消毒冻存管外表面。
3. 用1ml移液器小心的将细胞悬液转移至一个新的50ml离心管，避免剧烈吹吸。
4. 用1ml 心肌接种培养基润洗冻存管，以收集剩余细胞。然后逐滴加入含有细胞悬液的50ml离心管，由于zui初滴加的稀释比例较大，应维持在5秒1滴(50uL)的较慢速率，2分钟左右滴加完此1ml培养基，滴加过程中不断轻摇混匀。
5. 以每秒1滴的速率，逐滴加入4ml 心肌接种培养基，滴加过程中不断轻摇混匀。200g离心5分钟。
6. 用心肌接种培养基重悬细胞，轻柔吹打混匀，并接种到准备好的培养皿/瓶中，水平十字振动使细胞均匀分布。
7. 5% CO2的37℃恒温培养箱中培养48小时，更换为心肌维持培养基，维持培养。
心肌分化试剂盒的维持：
1. 37℃水浴预热心肌维持培养基。
2. 获得的心肌细胞用心肌维持培养基培养，每48小时换液一次;或者加入标准量150%的维持培养基，每72小时换液一次。
3. 细胞在4周内性状稳定。如果需要长期培养，为了维持细胞稳定性和纯度，需要定期采用心肌纯化*培养基进行处理，一般每4-6周处理一次，每次持续3-4天。
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