造血干细胞无血清培养基使用说明
更新时间：2016-04-25 点击次数：1577次
造血干细胞无血清培养基方法概述：
分离混合血液白细胞早期的方法，总是伴随红细胞聚集，只轻微影响白细胞。通过离心，红细胞密度增加聚集，同时可以从离心管上部收集白细胞。
Byum提出了一种更方便，通过使用Ficoll 甲泛影钠溶液离心快速分离方法。稀释的血液在Ficoll甲泛影钠溶液中分层，低速短时离心。红细胞和沉降到管底的粒细胞，和单个核细胞（淋巴细胞）和血小板可以从两个分层之间收集。
许多研究者不断努力，修订了Byum方法，MP生物医学公司生产的LSM，方法的*之处是运用,泛影钠成功的代替了甲泛影钠。
造血干细胞无血清培养基使用说明：
以下的操作步骤是zui初由Byum.设计的程序的众多改良版本中的一种。此程序的改良是通过运用除去血液中的纤维蛋白或抗凝血剂处理人体血液；这种改良对于其他物种来源血液或者其他组织非常有必要。
1.轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合
2.无菌转移3 mlLSM到15 ml离心管中。
3.混合2 ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液和2 ml 生理盐水
4.仔细的将稀释血液加入3 mlLSM（室温）于15ml离心管中，在血液和LSM中形成一个明显的分层。人造血干细胞无血清培养基不要将稀释血液混合入LSM中。
5.室温下400g离心15-30分钟，离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以再LSM上形成一层单核淋巴细胞，如上图所示。
6.吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。
7.吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中，室温离心10分钟，离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻，例如160 - 260 x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8. 用平衡盐缓冲液清洗细胞，用适当的培养基重悬细胞。
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