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技术支持

iPSC/ES胚胎干细胞培养基选择指南:重编程 维持 分化
更新时间:2016-06-24   点击次数:1840次

欢迎您致电 华雅再生医学旗舰公司:红荣微再(上海)生物工程技术有限公司 :152 1681 4001。华雅再生医学-客服: 316 808 6348

The TeSR™ family of feeder-free media are produced using rigorously pre-screened materials to ensure the highest levels of batch-to-batch consistency and experimental reproducibility, allowing you to minimize variation in your research and establish a
continuous TeSR™ media-based workflow. Each medium is based on published formulations1-3 from the laboratory of James Thomson, and allows researchers to maintain high quality embryonic stem (ES) cell and induced pluripotent stem (iPS) cell culture systems.

Which TeSR™ Feeder-Free Medium is Right for You?

Reprogram
TeSR™-E7™ is a xeno-free reprogramming medium optimized for human iPS cell induction from fibroblasts.
Based on the E8 formulation³ with TGFβ removed for improved reprogramming efficiency.
Pre-screened components ensure generation of high quality iPS cell colony morphology for easy identification and rapid subcloning.

ReproTeSR™ is a xeno-free reprogramming medium optimized for the generation of iPS cells from blood-derived cells.
Formulation is optimized for reprogramming of erythroid or CD34+ cells expanded in vitro from peripheral blood.
Rapid emergence of large colonies with high quality iPS cell-like morphology.


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Maintain
 mTeSR™1 is the most published medium for the culture of hPSCs.
 Over 700 peer-reviewed publications, including 35 Nature Publishing Group and 25 Cell Press.
 Maintained thousands of ES and iPS cell lines for more than 7 years in over 50 countries.
 Utilized in published protocols for a wide variety of applications including bioreactor expansion, single-cell cloning, and lineage-specific differentiation of mTeSR™1-maintained hPSCs.
 Contains pre-screened bovine serum albumin to stabilize the medium, aid in lipid-nutrient transport, and protect from cellular toxins and stresses.
 Maintains pluripotency of ES and iPS cells after extended periods in culture and supports the derivation of iPS cells and their in vitro differentiation into mature cell types.

TeSR™2 is a xeno-free version of mTeSR™1.
•    Modified formulation, but with all xeno-free components, to produce a more defined medium.
•    Compatible with published mTeSR™1 protocols for a wide variety of applications.
•    Contains recombinant human albumin to aid in lipid/nutrient transport and protect cultures from
cellular toxins and stresses.

TeSR™-E8™ is a xeno-free culture medium, based on the published E8 formulation.3,4
•    Contains only the 8 most essential components required for PSC maintenance.
•    Has 433x less protein than mTeSR™1.
•    Can be used with Corning® Matrigel® hESC-qualified matrix, or for a compley xeno-free system, with Vitronectin XF™.

Differentiate
        
Lineage-Specific Differentiation with STEMdiff™

Consistent differentiation of ES and iPS cell lines to downstream lineages can be challenging.   We recommend our STEMdiff™ suite of products for optimal and reproducible differentiation to cells of the:
•    Ectodermal Lineage: STEMdiff™ Neural Induction Medium, STEMdiff™ Neural Progenitor Medium, and STEMdiff™ Neural Progenitor Freezing Medium
•    Endodermal Lineage: STEMdiff™ Definitive Endoderm Kit and STEMdiff™ Definitive Endoderm Kit (TeSR™-E8™-Optimized)
•    Mesodermal Lineage: STEMdiff™ APEL™ Medium and STEMdiff™ APEL™-LI Medium

Low-Protein Differentiation with TeSR™-E5 and TeSR™-E6

TeSR™-E6 and TeSR™-E5 are low protein media that can be used for differentiation, screening assays and other applications where the removal of specific cytokines is desirable.  Other cytokines and growth factors can be added to these media for specific applications.
•    TeSR™-E6 is a defined, serum- and xeno-free medium that is based on the formulation of TeSR™-E8™ but does not contain bFGF, TGFβ.³
•    TeSR™-E5 is also a defined, serum- and xeno-free medium based on the formulation of TeSR™-E8™ but does not contain bFGF or TGFβ or insulin.³


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Cryopreserve
        mFreSR™ and FreSR™-S are defined, serum-free media optimized for cryopreservation of ES or iPS cells cultured in TeSR™ maintenance media. hPSCs cryopreserved in FreSR™ have higher thawing efficiencies than those reported with conventional methods using serum.5-8
•    Use mFreSR™ for cryopreservation of human ES and iPS cells as cell aggregates.
•    Use animal component-free FreSR™-S for cryopreservation of cells in single cell suspension.

Corning    Matrigel Basement Membrane Matrix基底膜基质胶(标准型)    5mL/瓶    华雅再生医学    BD    356234    ¥2,023
Corning    Matrigel Basement Membrane Matrix基底膜基质胶(标准型)    10mL/瓶    华雅再生医学    BD    354234    ¥3,859
Corning    Matrigel Basement Membrane Matrix基底膜基质胶(高浓度)    10mL/瓶    华雅再生医学    BD    354248    ¥6,045
Corning    Matrigel Matrix基底膜基质胶,低生长因子GFR(标准型)    5mL/瓶    华雅再生医学    BD    356230    ¥2,325
Corning    Matrigel Matrix基底膜基质胶,低生长因子GFR(标准型)    10mL/瓶    华雅再生医学    BD    354230    ¥4,533
Corning    Matrigel Matrix基底膜基质胶,低生长因子GFR,无酚红(标准型)    10mL/瓶    华雅再生医学    BD    356231    ¥4,883
Corning    Matrigel Invasion Chamber,8.0um PET膜,24个包被小室    24个/箱    华雅再生医学    BD    354480    ¥4,301

 

加拿大的STEMCELL公司(STEMCELL Technologies Inc.)近日宣布将推出一系列新产品,以加速人多能干细胞的研究和转化应用。这些新产品包括全新的多能干细胞培养基TeSR-E8,以及诱导多能干细胞定向分化的STEMdiff系列产品。
 
加拿大的STEMCELL公司(STEMCELL Technologies Inc.)近日宣布将推出一系列新产品,以加速人多能干细胞的研究和转化应用。这些新产品包括全新的多能干细胞培养基TeSR-E8,以及诱导多能干细胞定向分化的STEMdiff系列产品。

TeSR™-E8™是一种成分高度确定、无需滋养层细胞(feeder-free)的培养基,适用于人胚胎干细胞(hESC)和人诱导多能干细胞(iPSC)。TeSR-E8仅包含维持hESC和iPSC所需的zui关键成分,为多能干细胞的培养提供了一种更简单的条件。

此培养基是基于James Thomson实验室去年发表在《Nature Methods》上的E8配方。作为iPSC创始人之一,美国威斯康辛大学麦迪逊分校的James Thomson教授领导的研究小组曾开发出mTeSR™1和TeSR™2培养基。尽管TeSR培养基能够在没有动物蛋白的情况下支持干细胞的生长,但其中添加了人血清白蛋白和人源基质蛋白,这就使得培养条件极其昂贵,不适合日常使用。

James Thomson教授领导的研究小组对iPSC的培养条件进行了优化,去除了培养基中的BSA和BME,并在DMEM/F12培养基中添加了胰岛素、FGF2、维生素C、硒、转铁蛋白和TGFβ,开发出一种*确定的培养基E8。这种培养基能够支持人ESC和iPSC的未分化增殖。

TeSR-E8可与BD Matrigel™ hESC基质或玻璃粘连蛋白(vitronectin)共同使用。根据STEMCELL与威斯康辛大学校友研究基金会的协议,TeSR-E8培养基预计在今年9月份上市。

同时,STEMCELL还推出了STEMdiff系列产品,包括STEMdiff™ Definitive Endoderm / Cardiomyocyte / Hematopoietic kits。这些新的试剂盒可诱导hESC/iPSC定向分化成内胚层、心肌细胞和造血祖细胞。STEMdiff产品采用可靠的试剂和操作步骤,可使多能干细胞稳定地向多种谱系细胞分化。此产品经过优化,可与mTeSR™1和TeSR™2培养基共同使用,预计在今年10月份上市。

有了TeSR-E8和新的STEMdiff产品线,STEMCELL继续向人类多能干细胞研究提供全面、成分确定的完整工具。这些高质量的试剂将提高实验重复性,避免培养基中的可变成分,并增加ES细胞和iPS细胞培养的临床相关性。


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BeYaMATM 1  Juvi  Human iPSC/ESC Growth Medium
人多能干细胞无血清培养液*实验操作手册
一、    培养皿包被
1、    4℃溶解Matrigel(BD 354277)八小时,轻摇混匀。请注意:原液应是均质粘稠的半流体状态,要避免温度过高,否则Matrigel会变成凝胶状态。
2、    冰上预冷1.5ml离心管和移液器枪头,冰上快速将Matrigel分装成350-500ul/支,储存于-80℃,用前置于4℃解冻。
3、    将溶解的Matrigel加入25ml预冷的无血清DMEM/F12培养基中,轻轻混匀,避免产生气泡。
4、    将稀释的Matrigel加入六孔板中,1ml/孔,轻摇培养板,使Matrigel均匀铺在培养板底部。
5、    Parafilm封好包被的培养板,至于4℃储存,用前置于37℃培养箱中孵育至少1小时。
二、    培养液准备
1、    在4℃解冻BeYaMATM 1 5X Supplement(货号:HJ0103M)添加剂,加入BeYaMATM 1 Basal Medium(货号:HJ0102M)基础培养基中,形成500mL BeYaMATM 1 Complete Medium(货号:HJ0101M)*培养基。
2、    BeYaMATM 1*培养基可在4℃稳定储存2周。可按实际用量将BeYaMATM 1*培养基分装后置于-80或-20℃保存,避免反复冻融。
三、    hESCs/hiPSCs复苏
1、    复苏hESCs/hiPSCs前,复温Matrigel包被的培养板,吸弃孔内液体,加入2ml BeYaMATM 1*培养液及2ul 5uM/L Rock Inhibitor Y27632,用以促进细胞贴壁。
2、    从液氮罐中取出hESCs/hiPSCs冻存管,浸入37℃水浴,轻轻摇晃,直到细胞融化至仅剩一小块冰晶,迅速取出并用75%酒精擦拭冻存管外表面,转移至无菌超净台中。
3、    将细胞悬液接种至准备好的培养板中,轻轻晃动使细胞均匀分布在板底。
4、    小心将培养板放置于培养箱中,避免振动。
5、    30-90min后显微镜下观察细胞基本贴壁,更换新鲜BeYaMATM 1*培养液,之后每24h换液,4-6天后传代。

四、    hESCs/hiPSCs传代
1、    提前准备好Matrigel(BD 354277)包被过的六孔板,吸弃孔内包被液,加入2ml BeYaMATM 1*培养液。
2、    吸弃待传代hESCs/hiPSCs孔内的培养液,并用1ml无钙镁的PBS洗1遍。
3、    加入0.5ml Accutase细胞分离液使之*覆盖皿底。
4、    室温孵育5-8分钟或37℃孵育3-5分钟,显微镜下观察到大部分克隆细胞间出现间隙,细胞表面发亮但尚未相互分离时,可吸去Accutase。
5、    可将培养板放置37℃继续孵育1min,或者直接加入适量新鲜BeYaMATM 1*培养液,轻轻摇晃,干细胞集落基本脱落。亦可用细胞刮刀将剩余克隆轻轻刮下,尽量避免用枪头反复吹打细胞。
6、    将制备好的细胞悬液按1:3 - 1:6的比例接种至准备好的培养板中,注意细胞过密则克隆边界不圆滑,易分化,细胞过稀则克隆存活率降低。
7、    轻轻摇晃培养板让细胞均匀分散,置于37℃,5% CO2培养箱中培养8小时。
8、    每天更换培养液,待细胞密度达到80%以上,或者克隆中央密度过大,影响细胞生长时进行传代。

如果您在使用BeYaMATM 1  JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium 人多能干细胞无血清培养液的过程中,有任何技术问题,我们开通了Juvi科学家技术团队,欢迎您发邮件到Juvi@hystemcell.com 进行交流沟通,我们的目标是:推动中国iPS干细胞技术走向产业和临床!

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