康为世纪 无内毒素质粒DNA中提试剂盒
产品名称：康为世纪 无内毒素质粒DNA中提试剂盒产品货号：CW2105S英文名称：EndoFree Plasmid Midi Kit 产品规格：50 preps
产品简介：
内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种简单、快捷、高效提取无内毒素质粒的新方法，提取的质粒最大限度去除内毒素，并能有效去除基因组DNA、RNA、蛋白等污染。
本试剂盒适合提取5-15ml菌液，在碱裂解法裂解细胞的基础上通过新型硅基质膜高效专一的结合质粒DNA，每个吸附柱最高可吸附100 μg的质粒DNA，同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤柱，有效去除内毒素、蛋白等杂质。由本试剂盒所得质粒纯度高、质量稳定，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等下游实验。
产品名称：康为世纪 无内毒素质粒DNA中提试剂盒
产品货号：CW2105S
产品组分：
额外试剂需求：无水乙醇、异丙醇。
使用注意：
1．所有组分可在干燥、室温（15-30℃）环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2-8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可稳定保存6个月。
2．第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4．使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5．注意不要直接接触Buffer P2和Buffer E3，使用后应立即盖紧盖子。
6．提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
相关知识：
细菌的收获可通过离心来进行， 而细菌的裂解则可以采用多种方法中的任意一种， 这些方法包括用非离子型或离子型去污剂、 有机溶剂或碱进行处理及用加热处理等。 选择哪一种方法取决于３个因素：质粒的大小、小肠杆菌菌株及裂解后用于纯化质粒 DNA 的技术。
1)大质粒 (大于 15kb) 容易受损， 故应采用漫和裂解法从细胞中释放出来。 将细菌悬于蔗糖等渗溶液中，然后用溶菌酶和 EDTA 进生处理，破坏细胞壁和细胞外膜，再加入 SDS 一类去污剂溶解球形体。 这种方法最大限度地减小了从具有正压的细菌部把质粒释放出来所需要的作用力。
2)可用更剧烈的方法来分离小质粒。在加入 EDTA 后，有时还在加入溶菌酶后让细菌
暴露于去污剂， 通过煮沸或碱处理使之裂解。 这些处理可破坏碱基配对， 故可使宿主的线状染色体 DNA 变性，但闭环质粒 DNA 链由于处于拓扑缠绕状态而不能彼此分开。当条件恢复正常时，质粒 DNA 链迅速得到准确配置，重新形成*天然的超螺旋分子。
3)一些大肠杆菌菌株 (如 HB101 的一些变种衍生株 ) 用去污剂或加热裂解时可释放相对大量的糖类， 当随后用氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心进行质粒纯化时它们会惹出麻烦。 糖类会在梯度中紧靠超螺旋质粒 DNA 所占位置形成一致密的、模糊的区带。因此很难避免质粒 DNA 内污染有糖类，而糖类可抑制多种限制酶的活性。 故从诸 如 HB101 和 TG1 等大肠杆菌蓖株中大量制备质粒时，不宜使用煮沸法。
4)当从表达内切核酸酶 A 的大肠杆菌菌株 (endA+ 株，如 HB101) 中小量制备质粒时，建议不使用煮沸法。 因为煮沸不能*灭活内切核酸酶 A，以后在温育 (如用限制酶消化 )时，质粒 DNA 会被降解。但如果通过一个附加步骤 (用酚：氯仿进行抽提 )可以避免此问题。
储存与运输
室温 (15-30℃)
产品名称：康为世纪 无内毒素质粒DNA中提试剂盒
产品货号：CW2105S
产品订购信息
品牌 货号 名称 规格
康为世纪 CW2105S 无内毒素质粒中提试剂盒 50 preps
关于公司：
康为世纪生物科技股份有限公司是一家立足于生命科学领域，有自主知识产权的国家优良企业，主要从事高附加值、高技术含量的生物试剂的研发与生产，为生命科学研究、基因检测和体外诊断用户提供创新型生物产品和服务。产品线主要包括分子诊断原料酶、核酸采集与保护剂、核酸提取、分子诊断检测试剂等，打破了中国生物研究与产业对进口试剂的依赖。
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