康为世纪 酵母质粒小提试剂盒
产品名称:康为世纪 酵母质粒小提试剂盒产品货号:CW0509S英文名称:Yeast Plasmid Mini Kit产品规格:50 preps
产品简介:
本试剂盒在普通碱裂解法的基础上进行了改进,玻璃珠可以有效的破除酵母细胞壁,新型硅基质膜和缓冲液系统能高效专一的结合质粒DNA,同时可以最大限度去除蛋白及其他杂质,整个过程方便快捷,不需使用有毒有害试剂,可以同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外,也可用于大肠杆菌。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验,如连接、转化、测序和文库筛选等。
产品名称:康为世纪 酵母质粒小提试剂盒
产品货号:CW0509S
产品组分:
额外试剂需求:β-巯基乙醇、无水乙醇。
使用注意:
1.所有组分可在干燥、室温(15-30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2-8℃可保存更长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可稳定保存6个月。
2.第一次使用前,将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中,混匀,置于2–8℃保存。
3.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
4.使用前请检查Buffer P2、Buffer N3是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
5.注意不要直接接触Buffer P2和Buffer N3,使用后应立即盖紧盖子。
6.提取的质粒量与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关,通常酵母质粒拷贝数都很低,通过电泳或分光光度计法都很难检测到。
相关知识:
细菌的收获可通过离心来进行, 而细菌的裂解则可以采用多种方法中的任意一种, 这些方法包括用非离子型或离子型去污剂、 有机溶剂或碱进行处理及用加热处理等。 选择哪一种方法取决于3个因素:质粒的大小、小肠杆菌菌株及裂解后用于纯化质粒 DNA 的技术。
1)大质粒 (大于 15kb) 容易受损, 故应采用漫和裂解法从细胞中释放出来。 将细菌悬于蔗糖等渗溶液中,然后用溶菌酶和 EDTA 进生处理,破坏细胞壁和细胞外膜,再加入 SDS 一类去污剂溶解球形体。 这种方法最大限度地减小了从具有正压的细菌部把质粒释放出来所需要的作用力。
2)可用更剧烈的方法来分离小质粒。在加入 EDTA 后,有时还在加入溶菌酶后让细菌
暴露于去污剂, 通过煮沸或碱处理使之裂解。 这些处理可破坏碱基配对, 故可使宿主的线状染色体 DNA 变性,但闭环质粒 DNA 链由于处于拓扑缠绕状态而不能彼此分开。当条件恢复正常时,质粒 DNA 链迅速得到准确配置,重新形成*天然的超螺旋分子。
3)一些大肠杆菌菌株 (如 HB101 的一些变种衍生株 ) 用去污剂或加热裂解时可释放相对大量的糖类, 当随后用氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心进行质粒纯化时它们会惹出麻烦。 糖类会在梯度中紧靠超螺旋质粒 DNA 所占位置形成一致密的、模糊的区带。因此很难避免质粒 DNA 内污染有糖类,而糖类可抑制多种限制酶的活性。 故从诸 如 HB101 和 TG1 等大肠杆菌蓖株中大量制备质粒时,不宜使用煮沸法。
4)当从表达内切核酸酶 A 的大肠杆菌菌株 (endA+ 株,如 HB101) 中小量制备质粒时,建议不使用煮沸法。 因为煮沸不能*灭活内切核酸酶 A,以后在温育 (如用限制酶消化 )时,质粒 DNA 会被降解。但如果通过一个附加步骤 (用酚:氯仿进行抽提 )可以避免此问题。
储存与运输
室温 (15-30℃)
产品订购信息
品牌 货号 名称 规格
康为世纪 CW0509S 酵母质粒小提试剂盒 50preps
产品名称:康为世纪 酵母质粒小提试剂盒
产品货号:CW0509S
关于公司:
康为世纪生物科技股份有限公司是一家立足于生命科学领域,有自主知识产权的国家优良企业,主要从事高附加值、高技术含量的生物试剂的研发与生产,为生命科学研究、基因检测和体外诊断用户提供创新型生物产品和服务。产品线主要包括分子诊断原料酶、核酸采集与保护剂、核酸提取、分子诊断检测试剂等,打破了中国生物研究与产业对进口试剂的依赖。
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