康为世纪 植物RNA提取试剂盒 (DNase I)
产品名称:康为世纪 植物RNA提取试剂盒 (DNase I)产品货号:CW2598S英文名称:OminiPlant RNA Kit (Dnase I) 产品规格:50 preps
产品介绍:
本试剂盒适用于从多种植物中提取RNA,即便是从多糖多酚含量丰富的植物中也能成功提取高质量的RNA,如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、烟草叶、松针、银杏叶、杨树叶、石榴叶、冬青叶、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆等样本。*的裂解液配方,可使细胞中的RNA酶迅速灭活,有效去除多糖多酚对RNA提取的影响,无需氯仿等试剂,同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化,提取的总RNA纯度高,无基因组、蛋白质和其它杂质的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和体外翻译等多种下游实验。
产品名称:康为世纪 植物RNA提取试剂盒 (DNase I)
产品货号:CW2598S
产品组份:
操作步骤:
1.匀浆处理:取50-100mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末,加入500 μl Buffer RLS(使用前请先检查是否加入β-巯基乙醇),立即涡旋剧烈震荡混匀。
2.4°C 12,000 rpm(~13,400×g)离心2分钟。
3.将上清液转入已装入收集管的过滤柱(Spin Columns FS)中,4°C 12,000 rpm离心1分钟,小心吸取收集管中的上清并转移至新的RNase-Free 离心管(自备)中,枪头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
4.缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀),将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱(Spin Columns RM)中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入。4°C 12,000 rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5.向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1,4°C 12,000 rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6.配制DNase I 混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer和20 μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80 μl的反应液。
7.向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
8.向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1,4°C 12,000 rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9.向吸附柱RM中加入500 μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 4°C 12,000 rpm离心1 分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
10.重复步骤9。
11.4°C 12,000 rpm离心2分钟。
12.将吸附柱RM装入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5 ml)中,向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50 μl RNase-Free Water,室温放置2分钟,4°C 12,000 rpm离心1分钟,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
相关知识:
从不同细胞中分离提取高纯度、高质量的RNA对于很多分子生物学实验至关重要,如cDNA的合成、Northern印记分析、mRNA差别显示技术分离基因以及转录组测序等等实验,很大程度上取决于RNA的完整性。然而由于RNA自身结构的特点,以及周围环境中众多而又稳定存在的RNA酶,常常会使得RNA发生降解。在植物果实组织中,如玉米籽粒、柑橘、香蕉,含有丰富的多糖、蛋白,由于多糖与RNA在溶解性上高度一致,导致二者形成非常难溶的胶状复合物,使得RNA提取量下降,并造成一定程度上的降解;在植物老化组织中,如玉米老叶、冬青叶、茶叶,含有大量的多酚,当其氧化后,会使得RNA沉淀变成褐色,干扰了后续实验;有些产生次生代谢组织,如葡萄、苹果、甘蔗,其次生产物会降低RNA的获取率。
产品订购信息:
品牌 货号 名称 规格
康为世纪 CW2598S OminiPlant RNA Kit (Dnase I) 50preps
产品名称:康为世纪 植物RNA提取试剂盒 (DNase I)
产品货号:CW2598S
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