康为世纪 快速DNA无缝克隆预混试剂
产品名称：康为世纪 快速DNA无缝克隆预混试剂产品货号：CW3034M英文名称：One Step Seamless Cloning Mix产品规格：50 rxns
产品介绍：
DNA无缝克隆技术是一项简单、高效、快速将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点的方法，本产品不依赖于T4连接酶，不受载体和目的片段酶切位点的限制，而直接使用同源重组的方法，采用特殊的酶将任意方法线性化后的载体与线性化载体两端具有20-25 bp重叠区域的PCR片段定向重组，50℃反应5-15分钟即可快速实现1-5个片段的定向无缝隆。
产品名称：康为世纪 快速DNA无缝克隆预混试剂
产品货号：CW3034M
产品相关原理：
产品组分：
额外试剂需求：
1.插入片段，特异引物，线性化载体
2.高保真PCR试剂
3.感受态细胞
4.胶回收试剂盒
5.PCR仪，PCR反应管等。
使用前准备:
插入片段的制备与回收
插入片段的制备可用任意PCR酶扩增，克隆过程不受扩增产物平末端或粘末端（A尾）的影响（重组过程中将被去除，在最终克隆产物中不会出现），但为了减少扩增突变，特别是点突变实验中，建议使用高保真聚合酶（CW2965 Super Pfx Master Mix）进行扩增。
一般情况下，PCR产物推荐胶回收纯化以降低背景比例，如果插入片段来源于质粒模板，且该质粒与重组载体具有相同抗性，需用内切酶Dpn I消化PCR产物，以降低背景，提高阳性率。
相关使用说明：
1.重组产物转化
克隆感受态置于冰上解冻，取10ul反应产物加入100 ul感受态细胞中，轻弹管壁混匀，冰上静置30分钟。
42℃水浴热激90秒，立即置于冰上2-3分钟。
加入600 ul无抗LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养30分钟。
5000 rpm离心5分钟，弃多余培养液，剩余100 ul菌液重悬菌体，用无菌涂布棒
均匀涂布在正确抗性的平板上。
37℃培养箱倒置培养12-16小时。
2.阳性克隆的鉴定
可根据具体情况，选择菌落PCR鉴定、提取质粒进行限制性内切酶鉴定或测序鉴定。
保存条件：-20℃，保质期一年。
产品订购信息：
品牌 货号 名称 规格
康为世纪 CW2020M HiFiScript gDNA Removal RT MasterMix 100 rxns
产品名称：康为世纪 快速DNA无缝克隆预混试剂
产品货号：CW3034M
关于公司：
康为世纪是主要从事高附加值、高技术含量的生物试剂的研发与生产，为生命科学研究、基因检测和体外诊断用户提供创新型生物产品和服务。康为世纪建立了专业化、集约化、能够形成自主知识产权的技术创新体系和开放式的合作创新平台，构建成了公司完整的研发创新体系。
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