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康为世纪 快速DNA无缝克隆预混液

  • 型   号:CW3034S
  • 价   格:

产品名称:康为世纪 快速DNA无缝克隆预混液
产品货号:CW3034S
英文名称:One Step Seamless Cloning Mix
产品规格:20 rxns

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产品介绍:

 DNA无缝克隆技术是一项简单、高效、快速将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点的方法,本产品不依赖于T4连接酶,不受载体和目的片段酶切位点的限制,而直接使用同源重组的方法,采用特殊的酶将任意方法线性化后的载体与线性化载体两端具有20-25 bp重叠区域的PCR片段定向重组,50℃反应5-15分钟即可快速实现1-5个片段的定向无缝克隆。


产品名称:康为世纪 快速DNA无缝克隆预混液

产品货号:CW3034S


产品相关原理:

原理1.png原理2.png



产品特点:

1.15分钟可以将一个或者多个长、短PCR扩增片段(平/A端) 插入载体。

2.不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制,可以在任意位点进行克隆。

3.无缝克隆,插入点不会引入不需要的碱基序列。

4.高效、准确,克隆阳性率>95% 。



产品组分:

组分9.png


额外试剂需求:

1.插入片段,特异引物,线性化载体

2.高保真PCR试剂(推荐使用康为CW2965 Super Pfx MasterMix)

3.感受态细胞

4.胶回收试剂盒(CW2302 快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒)

5.PCR仪,PCR反应管等。


使用前准备:

线性化载体的制备回收

选择合适的克隆位点对载体进行线性化,载体线性化方式有两种:限制性内切酶酶切消化,反向PCR扩增。

a.酶切所得线性载体,单酶切或者双酶切均可,酶切后推荐用PCR产物纯化试剂盒或者胶回收试剂盒纯化载体。因无缝克隆产品体系中没有DNA连接酶,所以不会引起载体自连,重组产物转化后出现的假阳性克隆 (无插入片段) 是由酶切不*未线性化环状载体转化而形成的,所以我们推荐酶切后胶回收纯化,可以将未线性化载体比例降低到低程度。

b.反向PCR扩增得到线性化载体,推荐使用高保真聚合酶扩增,以减少扩增突变

的引入,使用环状质粒为模板时,建议使用内切酶Dpn I对PCR产物进行消化,以减少环状质粒模板残留引起的克隆假阳性。如果使用Dpn I消化质粒模板,需80℃加热20分钟失活Dpn I活性,以避免重组反应时残留Dpn I对克隆载体的降解。


相关使用说明:

1. 线性化载体与插入片段的使用量

载体一般用20-50 ng,插入片段与载体的摩尔比在2:1-3:1之间最佳;多片段连接的情况下,片段与片段之间摩尔比为1:1。

单片段克隆用量

最适克隆载体使用量=(0.02 x 克隆载体碱基对数)ng(0.03 pmol)

最适插入片段使用量=(0.04 x 插入片段碱基对数)ng(0.06 pmol)

多片段克隆用量(2-5个片段)

最适克隆载体使用量=(0.02 x 克隆载体碱基对数)ng(0.03 pmol)

每个插入片段的使用量=(0.02 x 每个插入片段碱基对数)ng(0.03 pmol)31.png

轻轻混匀,在50℃水浴或者PCR仪中反应5-15分钟,超过3个片段的连接,可以延长反应时间至30分钟。反应结束后,将EP管置于冰上降温后直接转化或者保存于-20℃。



保存条件:-20℃,保质期一年。


产品订购信息:

品牌             货号                   名称                                      规格

康为世纪  CW3034S  One Step Seamless Cloning Mix   20 rxns


产品名称:康为世纪 快速DNA无缝克隆预混液

产品货号:CW3034S


关于公司:

康为世纪是主要从事高附加值、高技术含量的生物试剂的研发与生产,为生命科学研究、基因检测和体外诊断用户提供创新型生物产品和服务。康为世纪建立了专业化、集约化、能够形成自主知识产权的技术创新体系和开放式的合作创新平台,构建成了公司完整的研发创新体系。

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红荣微再作为RNA、NGS、ctDNA、qPCR的分子诊断专业供应商,以“传递科学价值,服务科学研究"为宗旨,努力为客户提供质量可靠、货美价优的分子诊断试剂耗材,与客户携手为中国分子诊断的发展而前行。


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